Les connaissances microbiennes que vous voulez
Les micro-organismes sont un groupe d'organismes minuscules qui existent largement dans la nature et sont invisibles à l'œil nu et doivent être agrandis des centaines, des milliers voire des dizaines de milliers de fois à l'aide d'un microscope optique ou d'un microscope électronique. Ils ont les avantages d'une petite taille, d'une structure simple, d'une reproduction rapide, d'une variation facile et d'une forte capacité d'adaptation à l'environnement.
Classification des micro-organismes :
Il existe de nombreux types de micro-organismes, au moins plus de 100 000 types. Selon leur structure, la composition chimique et les habitudes de vie et d'autres différences peuvent être divisées en trois catégories.
Le noyau des cellules microbiennes eucaryotes a un degré de différenciation plus élevé, y compris la membrane nucléaire, le nucléole et les chromosomes; le cytoplasme a des organites complets (tels que le réticulum endoplasmique, le ribosome et les mitochondries, etc.). Les champignons appartiennent à ce type de microorganisme.
Les cellules microbiennes procaryotes ont un faible degré de différenciation nucléaire, seulement un nucléoplasme primitif, pas de membrane nucléaire ni de nucléole ; les organites ne sont pas très complets. Il existe de nombreuses espèces de ces micro-organismes, y compris les bactéries, les spirochètes, les mycoplasmes, les rickettsies, les chlamydia et les actinomycètes.
Les micro-organismes acellulaires n'ont pas de structure cellulaire typique ni de système enzymatique pour générer de l'énergie, et ne peuvent croître et se reproduire que dans des cellules vivantes. Les virus appartiennent à ce type de microorganisme.
Séparation et purification des micro-organismes
Une culture microbienne contenant plus d'une espèce est appelée culture mixte. Si toutes les cellules d'une colonie sont dérivées d'une cellule parentale, la colonie est appelée culture pure. Dans l'identification des espèces bactériennes, les microorganismes utilisés doivent généralement être des cultures pures. Le processus d'obtention d'une culture pure est appelé séparation et purification, et il existe de nombreuses méthodes.
1. Verser la méthode de la plaque
Tout d'abord, la suspension microbienne est diluée en série, et une certaine quantité de la dilution est entièrement mélangée avec le milieu gélosé nutritif dissous maintenu à environ 40-50 degré, puis le mélange est versé dans une boîte de Pétri stérile. Après solidification, la plaque a été incubée à l'envers dans une chambre constante. Une seule cellule est multipliée pour former une colonie, une seule colonie est prise pour faire une suspension, et les étapes ci-dessus sont répétées plusieurs fois pour obtenir une culture pure.
2. Méthode de revêtement de plaque plate
Tout d'abord, la suspension microbienne est correctement diluée et une certaine quantité de la dilution est placée sur une plaque de gélose nutritive stérile qui s'est solidifiée, puis la dilution est uniformément répartie sur la surface du milieu avec une spatule en verre stérile. Une seule colonie peut être obtenue par incubation à température constante.
3. Méthode de traçage de plaque
La méthode la plus simple pour isoler les micro-organismes est la strie. Strier une petite quantité de la culture sur la plaque à l'aide d'une anse stérile. Il existe de nombreuses méthodes de traçage. Les méthodes de traçage courantes qui sont plus susceptibles d'apparaître comme une seule colonie sont la méthode des barres obliques, la méthode des courbes, la méthode des carrés, la méthode des rayonnements et la méthode des quatre grilles. Lorsque la boucle d'inoculation recule à la surface du milieu, le liquide bactérien sur la boucle d'inoculation se dilue progressivement, et finalement une seule cellule est dispersée sur la ligne tracée. Après culture, chaque cellule devient une colonie.
4. Méthode de culture d'enrichissement
La méthode et le principe de la méthode de culture d'enrichissement sont très simples. Nous pouvons créer des conditions qui permettent uniquement aux microbes souhaités de se développer, et dans ces conditions, les microbes souhaités peuvent rivaliser efficacement avec d'autres microbes et dépasser de loin les autres microbes en termes de capacité de croissance. Si certains parasites obligatoires doivent être isolés, les échantillons doivent être inoculés dans les populations de cellules hôtes sensibles correspondantes pour se développer en grand nombre. Des bactéries parasites pures peuvent être obtenues par ensemencement répété.
5. Méthode anaérobie
En laboratoire, afin d'isoler certaines bactéries anaérobies, un tube à essai contenant le milieu d'origine peut être utilisé comme récipient de culture, et le tube à essai peut être chauffé dans un bain d'eau bouillante pendant plusieurs minutes pour expulser l'oxygène dissous dans le milieu . Il est ensuite rapidement refroidi et ensemencé. Après ensemencement, de la paraffine stérile a été ajoutée à la surface du milieu pour isoler le milieu de l'air. Une autre méthode consiste à remplacer le gaz dans le milieu par du N2 ou du CO2 après l'inoculation, puis à sceller l'embouchure du tube à essai au-dessus d'une flamme. Parfois, afin d'isoler plus efficacement certaines bactéries anaérobies, l'échantillon isolé peut être inoculé sur le milieu, puis la boîte de Pétri peut être placée dans un dispositif de culture anaérobie complètement scellé.
6. Méthode d'isolement d'une seule cellule (ou d'une seule spore)
Il s'agit de prendre la méthode de microséparation pour isoler directement des cellules individuelles ou des individus individuels à partir de populations mixtes pour la culture afin d'obtenir une culture pure. Pour les plus gros micro-organismes, un seul individu peut être extrait à l'aide d'un capillaire. Pour les micro-organismes avec des individus relativement petits, un micromanipulateur est nécessaire pour prélever des cellules microbiennes uniques ou des spores avec un capillaire ou une micro-aiguille, un crochet, une boucle, etc. sous le microscope pour obtenir une culture pure. La méthode de séparation à cellule unique a des exigences relativement élevées sur la technologie de fonctionnement.
Culture microbienne
1. Selon si l'oxygène est nécessaire pendant la culture, il peut être divisé en deux catégories : la culture aérobie et la culture anaérobie.
Culture aérobie : aussi appelée « culture aérobie ». C'est-à-dire que lorsque ce micro-organisme est cultivé, il a besoin d'oxygène pour être ajouté, sinon il ne se développera pas bien. Au laboratoire, les cultures inclinées sont obtenues en obtenant de l'air stérile de l'extérieur à travers des tampons de coton. La majeure partie de la culture liquide dans l'erlenmeyer est secouée par un agitateur, de sorte que l'air extérieur puisse pénétrer en permanence dans la bouteille.
Culture anaérobie : Aussi appelée « culture anaérobie ». De tels micro-organismes n'ont pas besoin d'oxygène pour participer à la culture. Dans le processus de culture de micro-organismes anaérobies, le point le plus important est d'éliminer l'oxygène du milieu.
2. Selon l'état physique du milieu, celui-ci peut être divisé en deux catégories : culture solide et culture liquide.
Culture solide : Il s'agit d'une méthode d'inoculation des souches dans un milieu solide lâche et riche en nutriments, et de culture de micro-organismes dans des conditions appropriées.
Culture liquide : Dans les expériences, la culture liquide peut faire multiplier rapidement les micro-organismes et obtenir un grand nombre de cultures. Dans certaines conditions, c'est aussi une méthode efficace pour les microorganismes pour sélectionner et enrichir les bactéries.
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Michel Peng
michael@bkmbio.com