Conditions de base pour la culture cellulaire
1. Milieu de culture cellulaire approprié
Un milieu de culture cellulaire approprié est l'une des conditions les plus importantes pour la croissance et la prolifération cellulaire in vitro. Le milieu de culture fournit non seulement une nutrition cellulaire et des substances de base pour favoriser la croissance et la prolifération cellulaire, mais fournit également un environnement vivant pour la croissance et la reproduction des cellules cultivées.
2. Sérum de haute qualité
Actuellement, la plupart des milieux synthétiques nécessitent l'ajout de sérum. Le sérum est l'un des composants les plus importants du milieu de culture cellulaire, contenant une variété de facteurs de croissance et d'autres nutriments nécessaires à la croissance cellulaire.
3. Température de croissance cellulaire constante
Pour maintenir la croissance vigoureuse des cellules cultivées, il doit y avoir une température constante et appropriée.
4. Environnement gazeux approprié
Le gaz est l'une des conditions nécessaires à la survie des cellules de mammifères, et les gaz nécessaires sont principalement l'oxygène et le dioxyde de carbone.
5. Température de culture cellulaire
Pour maintenir la croissance vigoureuse des cellules cultivées, il doit y avoir une température constante et appropriée. Différents types de cellules ont des exigences différentes en matière de température de culture. La température standard pour la culture cellulaire humaine est de 36,5 degrés ± 0,5 degrés. Un écart par rapport à cette plage de température affectera le métabolisme normal des cellules et même mourra.
6. Environnement gazeux approprié
Le gaz est l'une des conditions nécessaires à la survie de la culture de cellules de mammifères, et les gaz requis sont principalement l'oxygène et le dioxyde de carbone. L'oxygène participe au cycle de l'acide tricarboxylique, produisant de l'énergie pour la croissance et la prolifération cellulaire et synthétisant divers composants nécessaires à la croissance cellulaire.
Contamination courante de la culture cellulaire
1. Contamination bactérienne
La contamination bactérienne est la plus fréquente. Une fois que l'opération est légèrement incorrecte, cela entraînera une contamination des cellules. Après contamination bactérienne, il apparaîtra sous forme de fines bandes noires de sable lorsqu'il est observé au microscope. En forme de tige, etc. Deuxièmement, le milieu de culture devient jaune et trouble, et des sédiments fins en forme de sable sont clairement visibles dans la boîte de Pétri, et il y a une odeur étrange de temps en temps.
2. Contamination fongique
La solution de culture contaminée par des champignons est claire et transparente, pas comme une grande épidémie d'infection bactérienne, il est donc difficile de la détecter tôt. Parfois, cela ressemble à un filament sous le microscope, parfois cela ressemble à un corail, et lentement un filament noir très fin se développera. Lorsqu'il est trop tard, il est difficile pour les cellules d'être secourues.
3. Contamination par les moisissures
Comme pour les infections fongiques, parce que le milieu de culture est clair, la contamination fongique est difficile à détecter tôt, car il est souvent trop tard. Des impuretés floconneuses sont apparues lentement dans le milieu de culture, et des objets flottants en masse filamenteuse ont pu être vus au microscope, comme des chatons dans le vent. Les cellules peuvent encore se développer, mais avec le temps, les cellules se détériorent et cessent de croître.
4. Infection à mycoplasmes
Le milieu de culture devient trouble. Une fois que le mycoplasme a infecté les cellules, les modifications cytopathiques ne sont pas évidentes, mais l'état cellulaire s'aggrave et la croissance ralentit. Il peut y avoir de petites taches noires sous le microscope, mais le milieu de culture n'est généralement pas trouble. Après le passage des cellules, des taches noires intercellulaires sont apparues, les cellules ont été vacuolées et de nombreuses cellules ressemblaient à l'apoptose et à la nécrose. Finalement, les cellules ont flotté et sont mortes complètement.
Prévention de la contamination cellulaire
L'établissement de bonnes règles et réglementations peut grandement contribuer à réduire la contamination des cellules. Y compris le système d'accès, les normes d'exploitation et le système de gestion quotidienne.
Système d'accès : y compris le personnel et le matériel. Le personnel doit être formé avant de pouvoir opérer par lui-même et doit satisfaire aux exigences de port avant d'entrer dans le laboratoire, telles que blouses blanches, blouses d'isolement, masques, gants, etc. Pour les articles nécessaires, les articles non jetables doivent être strictement stérilisés et stérilisés, et les articles achetés doivent être achetés auprès de canaux réguliers et fiables. Les cellules nouvellement achetées doivent être testées et vérifiées avant utilisation.
Spécifications de fonctionnement : Il est préférable de formuler des spécifications pour les opérations de routine, et le personnel de laboratoire doit suivre les spécifications de fonctionnement, qui ne peuvent pas être modifiées à volonté, et également cultiver de bonnes habitudes de fonctionnement pour le personnel de laboratoire. Par exemple, après que la pointe de la pipette a été aspirée, elle ne sera pas étendue dans le milieu une deuxième fois et une quantité suffisante de milieu sera aspirée une fois. Lors de l'ajout de liquide, le liquide doit être ajouté en suspension autant que possible, ce qui peut empêcher efficacement la contamination par les mycoplasmes et la contamination croisée des cellules. De plus, si possible, n'opérer qu'une seule lignée cellulaire à la fois, et il est préférable d'avoir un petit intervalle de temps entre les cellules pour éviter la contamination croisée.
Système de gestion quotidienne : Il comprend les règles et méthodes d'utilisation, de nettoyage et d'entretien de l'environnement et des consommables, réactifs, etc. échantillons de cellules. Pour les sources de contamination qui ne sont pas faciles à trouver, il est préférable d'effectuer des tests réguliers, principalement la contamination par les mycoplasmes et la contamination croisée cellulaire.
BKMAM Bio fournit les consommables correspondants pour la culture cellulaire :
Boîtes de pétri rondes/carrées en plastique jetables :
Matériau polystyrène (PS) à haute transparence ;
La surface est lisse et plate et il n'y a pas de distorsion optique des cellules sous observation au microscope;
La conception empilable facilite l'empilage et le stockage;
Stérilisation à l'oxyde d'éthylène (EO);
Résistance à l'usure et à la corrosion.
Traitement adhérent des boites de culture cellulaire :
Matériau polystyrène (PS);
Stérilisation par faisceau d'électrons, pas de pyrogène, pas de toxine ;
Traitement de surface au plasma sous vide, excellente adhérence cellulaire;
La surface est lisse et plate et il n'y a pas de distorsion optique des cellules sous observation au microscope;
La conception empilable facilite l'empilage et le stockage.
Plaques de culture cellulaire en plastique :
Matériau polystyrène (PS);
Adapté à la culture cellulaire normale, type plaque de traitement non adhérente ;
Aucun pyrogène, aucune toxine, stérilisé;
Emballage indépendant de type déchirure facile, facile à utiliser ;
Traitement adhérent des plaques de culture cellulaire :
Matériau polystyrène (PS);
Plaque de type traitement adhérent (TC treatment), adaptée à la culture de cellules adhérentes ;
Aucun pyrogène, aucune toxine, stérilisé;
Emballage indépendant de type déchirure facile, facile à utiliser ;
Tous sont à fond plat.
Traitement adhérent des flacons de culture cellulaire :
Matériau polystyrène (PS);
Stérilisation par faisceau d'électrons, pas de pyrogène, pas de toxine ;
Traitement de surface au plasma sous vide, excellente adhérence cellulaire;
Housse respirante, qui favorise les échanges gazeux et empêche le passage des micro-organismes.
Cryotubes de spin internes/externes :
100 % polypropylène pur (PP) ;
Peut supporter une stérilisation à 15 psi, 121 degrés ;
La paroi du tube est épaissie et le corps du tube a une échelle et une zone d'écriture;
Il y a un joint annulaire en silicone entre le filetage du couvercle du tuyau et le corps du tuyau pour assurer l'étanchéité ;
Pas de DNase, pas de RNase, pas de pyrogène, pas d'endotoxine.
