ELISA avec un mauvais résultat ?Suivez-nous pour choisir la bonne plaque Elisa.
Le choix d'une plaque ELISA appropriée est la première étape d'une expérience ELISA réussie, mais beaucoup de gens l'ignorent. Lorsque les gens font des expériences, ils ne considèrent souvent que l'expérience elle-même, mais ne savent pas que le produit a souvent un grand impact sur l'expérience. Une sélection appropriée des produits contribuera au succès de l'expérience. Nous considérons généralement les facteurs suivants lors de la réalisation d'expériences ELISA :
1.La forme du fond
À l'heure actuelle, les fabricants conçoivent les puits marqués par une enzyme sous forme de colonnes indépendantes et augmentent de manière appropriée la distance entre les puits afin qu'ils puissent être séparés indépendamment, minimisant ainsi la contamination croisée. Différents types de plaques Elisa ont différentes formes de fond de puits. Voici quelques formes courantes de fond de trou :
Fond plat : Le fond est horizontal, aussi appelé fond F. La lumière ne sera pas déviée par le fond, qui peut transmettre la lumière dans la plus grande mesure. À utiliser pour les expériences nécessitant un fond rond pour la visibilité ou pour d'autres raisons.
Fond rond : également connu sous le nom de fond en U, fournit les meilleurs résultats de nettoyage et des performances hybrides, adaptés aux applications qui doivent tester les sédiments.
Fond en C : Il peut fournir un bon effet de nettoyage entre le fond plat et le fond rond, tout en combinant les avantages du fond plat.
Cone Bottom : Également connu sous le nom de fond en V, il convient à l'échantillonnage et au stockage précis de micro-échantillons pour une récupération optimale de petits volumes.
2. La couleur de la plaque Elisa
Il existe trois couleurs de l'assiette Elisa : transparent, noir et blanc.
La majorité des ELISA choisissent des plaques transparentes comme matériaux expérimentaux. Les plaques Elisa blanches et noires sont généralement utilisées pour la détection de luminescence. La plaque ELISA noire elle-même absorbe la lumière, son signal est donc plus faible que celui de la plaque ELISA blanche. Les plaques Elisa noires sont généralement utilisées pour détecter une lumière plus forte, telle que la détection de fluorescence ; au contraire, les plaques Elisa blanches peuvent être utilisées pour une détection de lumière plus faible et sont souvent utilisées pour la chimiluminescence générale et le développement de la couleur du substrat (comme la double luciférase). analyse du gène rapporteur).
3. Le matériau de la plaque Elisa
Les matériaux courants sont le polyéthylène (PE), le polypropylène (PP), le polystyrène (PS), le chlorure de polyvinyle (PVC) et le polycarbonate (PC).
Les matériaux les plus utilisés dans ELSIA sont le polystyrène et le chlorure de polyvinyle. Le panneau souple en chlorure de polyvinyle est mince, peut être coupé et son prix est bas. L'inconvénient est que la finition n'est pas aussi bonne que le panneau de polystyrène et que le fond du trou n'est pas aussi plat que le polystyrène. Mais la valeur de fond correspondante augmentera également. Habituellement, un traitement de greffage ionique est effectué sur la surface de la plaque ELISA et des groupes fonctionnels actifs tels que des groupes aldéhyde, des groupes amino et des groupes époxy sont introduits dans la surface du polymère pour améliorer les performances de la surface du substrat.
4. différents mécanismes de liaison
Une liaison efficace du matériau de revêtement à la surface inférieure de la plaque est une étape cruciale en ELISA. Par conséquent, les caractéristiques structurelles et les propriétés chimiques de la substance à revêtir doivent être soigneusement analysées avant l'expérience pour sélectionner une plaque Elisa appropriée. D'une manière générale, il existe plusieurs manières de lier le matériau d'enrobage au fond de la plaque : adsorption passive, liaison covalente et capture par affinité.
Adsorption passive : Le mécanisme d'adsorption passive est complexe et la liaison entre le matériau de revêtement et le fond de la plaque repose principalement sur des forces intermoléculaires (force de van der Waals) et des liaisons hydrogène. Dans la plupart des ELISA, la liaison de la substance de revêtement au fond de la plaque est réalisée par adsorption passive. Généralement, la liaison entre les antigènes (ou anticorps) de poids moléculaire moyen et élevé et le fond de la plaque est réalisée par adsorption passive. Les caractéristiques hydrophobes/hydrophiles de la surface inférieure de la plaque sont souvent prises en compte lors de la sélection d'une plaque Elisa. Le tableau suivant répertorie le champ d'application et l'utilisation de différentes surfaces de substrats hydrophiles :
hydrophile | Reliure prioritaire | L'utilisation principale |
- | Molécules contenant des régions hydrophobes significatives, telles que : lipides, lipoprotéines, grandes protéines | Antigène ELISA, FlA, LIA |
plus | Biomolécules aux propriétés hydrophiles/hydrophobes telles que : protéines moyennes à grosses, immunoglobulines, albumine | ELISA Sandwich Double Anticorps, ELISA Antigène |
plus plus | Biomolécules aux propriétés hydrophiles/hydrophobes telles que : petites à grandes protéines, immunoglobulines, albumine, LPS, protéines phosphorylées, glycoprotéines | Double anticorps ELISA, FIA, LIA |
plus plus plus | Glycoprotéines, molécules lipidiques polaires, phospholipides, cardiolipides | Antigène ELISA |
Capture d'affinité: La capture d'affinité est basée sur la liaison spécifique de macromolécules marquées à leurs récepteurs correspondants. Les macromolécules marquées peuvent être obtenues soit par couplage chimique, soit par génie génétique.
Les fonctionnalités d'Affinity Capture sont les suivantes :
1.haute spécificité
2.Peut améliorer le rapport signal/bruit des résultats de mesure
Les surfaces de fond de puits les plus courantes sont les suivantes : surface revêtue de streptavidine (streptavidine) ; surface revêtue de chélate de nickel (Nickel Chelate) et surface revêtue de glutathion (Glutathion, GSH).
3. Surface de la streptavidine : L'affinité et la spécificité élevées de la streptavidine et de la biotine sont utilisées pour réaliser la liaison de la plaque inférieure à la protéine enrobée.
4. Surface du chélate de nickel : Le chélate de nickel est attaché à la surface du polymère pour lier les protéines de fusion avec des étiquettes His (histidine).
5. Surface de glutathion : Utilisation de la spécificité de l'enzyme et du substrat entre le glutathion et la glutathion sulfhydryltransférase (GST) pour obtenir la liaison de la plaque inférieure à la protéine d'enveloppe.
Pourquoi choisir la plaque BKMAM Elisa ?
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Base plate, même épaisseur et taille uniforme pour les pôles de réaction,
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