Comment choisir les bons tubes PCR ?
Réponse: Les tubes PCR BKMAM conviennent aux instruments PCR grand public et aux instruments PCR en temps réel sur le marché (instruments PCR BD, Beckman et Wanshi).
Comparaison de la PCR quantitative en temps réel, de la PCR numérique et de la PCR traditionnelle :
Vue d’ensemble de la PCR numérique : mesurez la proportion de répétitions négatives pour déterminer le nombre absolu de copies.
Vue d’ensemble de la PCR en temps réel : Les mesures sont effectuées au fur et à mesure que l’amplification par PCR se produit.
Vue d’ensemble de la PCR traditionnelle : mesurer la quantité de produit PCR accumulé à la fin du cycle de PCR.
La PCR numérique est-elle quantitative ?
R : Oui, la proportion de réponses RCR négatives correspond à l’algorithme statistique de Poisson.
La PCR en temps réel est-elle quantitative ?
R : Oui, car les données sont collectées pendant la phase exponentielle (logarithmique) de la PCR, au cours de laquelle la quantité de produit PCR est proportionnelle à la quantité de modèle d’acide nucléique.
La PCR traditionnelle est-elle quantitative?
R: Non, mais comparer l’intensité de la bande amplifiée sur le gel à une norme de concentration connue peut vous donner un résultat « semi-quantitatif ».
Applications de la PCR numérique : quantification absolue de la charge virale, quantification absolue des étalons d’acides nucléiques, quantification absolue des bibliothèques de séquençage de nouvelle génération, détection d’allèles rares, quantification absolue de l’expression des gènes, enrichissement et séparation des mélanges
Applications de la PCR en temps réel : quantification de l’expression génique, validation des microréseaux, contrôle de la qualité et validation des essais, détection des agents pathogènes
, génotypage SNP, variation du nombre de copies, analyse de microARN, quantification de virus, expériences siRNA/ARNi
Applications de la PCR traditionnelle : amplification de l’ADN, séquençage, génotypage, clonage moléculaire
Conclusion: Avantages de la PCR numérique: pas besoin de s’appuyer sur des références ou des normes, la précision souhaitée peut être atteinte en augmentant le nombre total de répétitions PCR, une tolérance élevée aux inhibiteurs, la capacité d’analyser des mélanges complexes
Contrairement à la qPCR traditionnelle, la PCR numérique répond linéairement au nombre de copies qui émergent et de petites différences de pliage-changement peuvent être détectées.
Avantages de la PCR en temps réel : plage dynamique de détection accrue, aucun traitement post-PCR requis, détection capable de couvrir des changements aussi bas que 2 fois, acquisition de données pendant la phase exponentielle de la PCR, augmentation du signal de fluorescence rapporteur avec les amplicons résultants Proportionnel en nombre, les sondes de clivage fournissent un enregistrement permanent du clivage des amplicons
Inconvénients de la PCR traditionnelle : faible précision, faible sensibilité, petite plage dynamique< 2="" logs,="" low="" resolution,="" non-automation,="" only="" differential="" analysis="" based="" on="" specifications,="" results="" not="" represented="" as="" numbers,="" insufficient="" quantification="" using="" ethidium="" bromide="" staining,="">
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Michaël Peng
Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd
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