Les micro-organismes sont un groupe d'organismes microscopiques qui sont largement distribués dans la nature et invisibles à l'œil nu, y compris les bactéries, les spirochètes, les rickettsies, les chlamydia, les mycoplasmes, les actinomycètes, les champignons, les virus, etc., avec une structure simple, et existent dans une seule cellule, groupe cellulaire ou état non cellulaire. Dans des conditions de fourniture de nutriments et d'un environnement approprié, ils peuvent généralement vivre de manière indépendante et se développer rapidement. Afin d'éviter la mort et la pollution des micro-organismes, de maintenir leurs propriétés d'origine essentiellement stables et de faciliter la recherche et l'utilisation, il est nécessaire d'utiliser la technologie de conservation des souches. Voici quelques méthodes courantes de conservation des bactéries.
Cryo préservation
Cette méthode convient à la plupart des micro-organismes et virus nécessitant une conservation à long terme. Le principe est que dans l'environnement à très basse température, l'activité métabolique microbienne s'arrête, et généralement plus la température est basse, meilleur est l'effet.
Méthode d'enregistrement
Utilisez un tube de cryoconservation pour conserver la bacteria, et ont en même temps besoin d'agents protecteurs, tels que la glycérine, la poudre de mouton dégraissée ou le diméthylsulfoxyde. Le tube de stockage congelé contenant des bactéries est placé dans un réfrigérateur à - 60~- 80 degré pour la congélation et le stockage.
Méthode de conservation de la paraffine liquide
La méthode de conservation de la paraffine liquide est applicable à certaines bactéries qui ne peuvent pas décomposer la paraffine, telles que la levure, le bacille, le pénicillium, l'aspergillus, etc. Certaines bactéries et champignons ne conviennent pas à la conservation par cette méthode. La méthode de la paraffine liquide utilise de la paraffine liquide pour couvrir, le métabolisme microbien est inhibé et le vieillissement bactérien est retardé. La méthode de la paraffine peut empêcher l'oxygène d'entrer, rendant les bactéries aérobies incapables de continuer à se développer. En même temps, si l'eau du milieu de culture s'évapore, il est facile de provoquer la mort bactérienne. La méthode à la paraffine peut empêcher l'eau du milieu de culture de s'évaporer et prolonger le temps de conservation des bactéries.
Méthode d'enregistrement
Dans des conditions stériles, injectez de la paraffine liquide stérilisée dans la culture inclinée nouvellement cultivée, le niveau de liquide est supérieur de 1 cm à 2 cm au sommet de l'inclinaison, ajoutez un bouchon en caoutchouc et scellez avec de la paraffine solide pour isoler les bactéries de l'air. La souche injectée avec de l'huile de paraffine doit être stockée debout dans un endroit sec à basse température (4 degrés ~ 6 degrés) ou à température ambiante.
Méthode de conservation par lyophilisation
Cette méthode convient à la conservation de la plupart des micro-organismes, mais pas aux champignons filamenteux qui ne produisent pas de spores. La méthode de conservation par lyophilisation consiste à conserver les bactéries dans des conditions de basse température, sèches et anoxiques. C'est-à-dire congeler rapidement la souche à basse température pour garder le micro-organisme intact, puis décompresser et extraire l'air pour sublimer la glace jusqu'à ce qu'elle soit déshydratée et séchée, et sceller et isoler l'air à l'état vide pour arrêter l'activité métabolique microbienne , afin de le conserver longtemps.
Méthode d'enregistrement
Ajouter un agent protecteur dans le tube d'ampoule selon certaines formules, puis ajouter des bactéries pour préparer la suspension bactérienne. Pré-libérer le tube d'ampoule à - 15~- 20 degré, puis sécher le tube d'ampoule avec un sécheur sous vide et sceller le tube d'ampoule. Conserver à basse température et à l'abri de la lumière.
Méthode de conservation du tube de sable
Cette méthode convient à la préservation des actinomycètes sporogènes, des bacilles, etc., mais pas à la préservation des champignons et des champignons pathogènes qui se concentrent principalement sur le développement des hyphes. L'utilisation de sable fin pour créer des conditions sèches peut ralentir les activités métaboliques des micro-organismes qui peuvent produire des spores ou des spores dans un environnement sec, inhiber leur vitesse de reproduction et avoir une forte résistance à la mort. Cette méthode peut réduire la mutation de la souche et prolonger le temps de survie.
Méthode d'enregistrement
Tamisez le sable de rivière et de mer avec 60 mailles, jetez les grosses particules et les impuretés, puis tamisez avec 80 mailles pour éliminer le sable fin. Absorbez le fer avec de la pierre d'absorption de fer, mettez-le dans le récipient et imbibez-le d'acide chlorhydrique à 10 %. S'il y a beaucoup de matières organiques dans le sable de la rivière, faites-le tremper avec de l'acide chlorhydrique à 20 %. Après 24h, retirer l'acide chlorhydrique, le faire tremper plusieurs fois dans l'eau du robinet jusqu'à ce qu'il soit neutre, et cuire ou sécher le sable. De plus, dix sols sous la surface non contaminée ont été criblés pendant 100 jours, lavés à neutre avec de l'eau du robinet et séchés. Mélanger uniformément selon le sable : sol=2 : 1, sous-emballage dans un tube à ampoule ou un petit tube à essai, la hauteur est d'environ 1 cm, branchez le bouchon en coton, autoclave à 121 degrés pendant 1 h à 1,5 h, ou autoclave à pression normale pendant 3 fois, 16 fois par jour. Séchez-le à moins de 50 degrés (la température ne doit pas être trop élevée, sinon la matière organique du sol sera décomposée à haute température pour produire des substances nocives, ce qui affectera les performances de la souche), et il ne peut être utilisé que s'il n'y a pas croissance microbienne après inspection.
Préparez ensuite la suspension bactérienne et ajoutez la suspension bactérienne dans le tuyau de sable. Mettez le tuyau de sable contenant la suspension bactérienne dans le sécheur sous vide pour le séchage sous vide. Utilisez une flamme pour sceller et faire fondre la buse, stockez-la à basse température (4 degrés ~ 10 degrés) ou dans un endroit sec à température normale, et vérifiez régulièrement la vitalité et les bactéries diverses.
Méthode de conservation des billes de porcelaine
Il existe généralement sur le marché des tubes de conservation en perles de porcelaine finis faciles à utiliser pour la conservation à basse température des bactéries. Le tube de conservation des billes de porcelaine est généralement composé d'un tube de stockage congelé, ainsi que de la solution de conservation interne et des billes de porcelaine. Les billes de porcelaine à surface concave et convexe sont utilisées pour l'adsorption et la conservation des bactéries. La souche peut être stockée pendant une longue période à - 20 degré ou - 80 degré . Il est plus facile à opérer que ce soit en stockage ou en réanimation.
Méthode d'enregistrement
Grattez la culture pure de bactéries de la plaque et placez-la dans le tube de conservation de la culture, et configurez-la grossièrement en 3-4 concentrations de Michaelis. Agiter pour émulsionner les bactéries, laver la solution de conservation, serrer le tube de conservation et congeler à basse température.
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